Pembuatan Media Agar dan Sterilisasi

Tujuan: - Membuat media KNA.

              - Membuat media TA.

              - Melakukan sterilisasi alat dan bahan yang digunakan dalam percobaan.

Dasar teori.

            Jenis medium sangat bervariasi tergantung kepada apa yang dijadikan dasar penamaan. Berdasarkan kepada bentuknya, dikenal 3 macam medium. Yaitu, medium cair, medium semi solid, dan medium padat.

            Berdasarkan fungsi/sifatnya beberapa macam medium, yaitu medium umum, medium selektif, dan medium diferensial.

            Berdasarkan komposisi kimianya, dikenal medium alami, medium semi sintetik, dan medium sintetik.

            Sebelum praktikkum, kita perlu melakukan sterilisasi terhadap medium dan alat-alat yang digunakan untuk kegiatan praktikkum. Sterilisasi adalah suatu program untuk mematikan semua organism yang terdapat pada atau di dalam suatu benda. Pemilihan cara sterilisasi didasarkan pada sifat bahan yang akan disterilkan. Cara sterilisasi yang umum digunakan secara rutin di laboratorium mikrobiologi yaitu dengan pemanasan. Bila panas yang digunakan bersama dengan uap air, maka disebut sterilisasi panas lembab (dengan menggunakan autoklaf). Bila tanpa kelembapan disebut sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering (dengan oven).

Alat dan Bahan :

-      Beaker Glass                                                   - Daging tanpa lemak

-      Gelas ukur                                                       - Aquades

-      Batang pengaduk                                            - Tauge

-      Tabung reaksi                                                  - Bacto pepton

-      pH indicator/pH meter                                    - Agar-agar

-      Corong                                                            - NaCl

-      Kertas saring                                                   - Sukrosa

-      Kapas                                                              - Cawan petri

-      Pembakar                                                        - Autoklaf

Cara pembuatan media.

a.)                Kaldu nutrisi agar

1.)                Buatlah ekstrak daging (daging 0,5 kg direbus dalam air 1000 ml hingga volume air menjadi setengahnya atau direbus selama 1-2 jam).

2.)                Saring ekstrak daging dengan kertas saring, kemudian tambahkan akuades hingga volume menjadi 1000 ml.

3.)                Masukkan pepton 10,0 gram, NaCl 5,0 gram dan agar-agar 15,0 gram. Kemudian panaskan suspense tersebut hingga mendidih selama 15 menit dengan menggunakan magnetic stirrer with hotplate.

4.)                Ukur pH, usahakan pH menjadi 6,8 – 7,3.

5.)                Buatlah agar diri dan agar miring dengan menggunakan tabung reaksi. Untuk agar diri, masukkan suspensi agar kesetiap tabung sebanyak 12-15 ml dan untuk agar miring masukkan suspense agar sebanyak 3-5 ml.

6.)                Tutup semua tabung reaksi dengan kapas sebaik mungkin. Sterilkan semua tabung dan cawan petri dengan menggunakan autoklaf selama 15 – 20 menit pada suhu 121 C.

7.)                Setelah disterilkan, biarkan agar diri dalam keadaan tegak dan biarkan agar miring siletakkan dalam keadaan miring. Biarkan sampai dingin.

b.)                Tauge agar

1.)                Buatlah ekstrak tauge (dari 100,0 gram tauge digerus atau dihaluskan dan diambil airnya), saring ekstrak dengan kertas saring kemudian tambahkan akuades hingga volume menjadi 1000 ml.

2.)                Tambahkan sukrosa 60,0 gram dan agar-agar 15,0 gram. Panaskan suspense sampai mendidih selama 20 menit.

3.)                Masukkan suspense ke dalam tabung reaksi masing-masing 12-15 ml untuk agar diri.

4.)                Sterilkan dengan autoklaf selama 15-20 menit pada suhu 121 C.